电泳是分离p53蛋白的核心步骤，胶浓度、电压参数及变性处理直接影响条带分离效果，尤其需区分全长p53与剪接体。

问题原因：👇

小鼠组织普遍存在47 kDa的ΔNp53剪接体，与人类全长p53（理论分子量53 kDa）仅差6 kDa，若胶浓度不足，两条带易重叠；上样前过度热变性会导致p53形成热聚集体，出现非特异性“幽灵带”或目标条带弥散。

问题解决方法：👇

（1）采用8%分离胶+4%浓缩胶，开云app恒压80 V电泳30分钟后转为120 V电泳90分钟，确保47 kDa剪接体与53 kDa全长蛋白条带间距≥2 mm，便于清晰区分；

（2）上样前95℃短时变性3分钟，禁用100℃变性5分钟以上，避免热聚集体产生。

抗体推荐：👇

AbmartTA0879抗体，其对p53全长及剪接体的特异性识别，结合优化的电泳条件，可准确区分不同分子量的p53条带。

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发布于：上海市

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